紫外-可見分光光度法是基于物質(zhì)分子對紫外（200-400nm）和可見光（400-800nm）區(qū)域電磁輻射的選擇性吸收而建立的分析方法。其核心原理是朗伯-比爾定律（Lambert-BeerLaw），即當一束平行單色光通過均勻、非散射的溶液時，溶液的吸光度（A）與吸光物質(zhì)的濃度（c）及光程長度（b）成正比，是物質(zhì)在特定波長下的特征常數(shù)，反映吸光能力。
電子躍遷機制：紫外-可見光的能量與分子中價電子（如σ電子、π電子、n孤對電子）的躍遷所需能量匹配。當光子能量等于電子基態(tài)與激發(fā)態(tài)的能級差時，電子吸收光子發(fā)生躍遷，常見類型包括：π→π（不飽和鍵）、n→π（含雜原子基團）、電荷轉(zhuǎn)移躍遷及配體場躍遷（配合物）。
儀器組成：分光光度計主要由光源（氘燈紫外區(qū)、鎢燈可見區(qū)）、單色器（分光棱鏡或光柵）、樣品室、檢測器（光電倍增管或光電二極管）及信號處理器構(gòu)成。單色器將光源發(fā)出的復合光分解為單色光，通過樣品后檢測透射光強度，計算吸光度。
應用特點：
1.定性分析：通過吸收光譜（吸收峰位置、形狀）鑒定官能團或共軛結(jié)構(gòu)，如苯環(huán)在250nm出現(xiàn)B吸收帶。
2.定量分析：依據(jù)比爾定律，通過標準曲線法或直接比較法測定濃度，靈敏度可達10⁻⁶~10⁻⁴mol/L。
3.局限性：需樣品透明且穩(wěn)定；重疊吸收峰需解譜；非吸收組分可能干擾。
該方法廣泛用于有機化合物、生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸）及無機離子的檢測，是化學、生物、環(huán)境等領(lǐng)域的基礎(chǔ)分析手段。
紫外可見分光光度法原理
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